محصولات مشابه
توضیحات محصول
معرفی و حیطه کاربرد کیت
کیت HumPure Viral RNA Extraction برای استخراج RNA انواع ویروسها با کیفیت بالا از مایعات فاقد سلول بدن از نمونه های انسانی و حیوانی طراحی شده است. کیت حاضر که مبتنی بر فناوری ستون سیلیکا است و با پروتوکلی راحت امکان استخراج همزمان تعداد زیادی نمونه را ممکن میسازد. لذا برای آزمایشگاه های تخصصی با تعداد نمونه بالا خصوصا در دوره شیوع پاندمی کووید-19 بسیار مناسب خواهد بود. محصول RNA استخراج شده بوسیله HumPure Viral RNA Extraction از کیفیت بسیار بالایی برخوردار بوده و فاقد پروتئین، نوکلئاز و آلودگی های تداخل کننده برای واکنش های پایین دستی می باشد. RNA استخراج شده بوسیله این کیت را می توان به صورت مستقیم در one-step qPCR و Nucleic acid based assays مورد استفاده قرار داد.
| خصوصیات | توضیحات |
| فناوری جداسازی | ستون سیلیکایی |
| نوع نمونه | مایعات عاری از سلول، سرم، پلاسما، بزاق |
| شیوه کار | دستی |
| مقدار نمونه | ul 140 |
| مدت زمان فرایند استخراج | 20 دقیقه |
| غلظت بدست آمده | متفاوت بر حسب نمونه ورودی |
| Carrier RNA | تعبیه شده در کیت |
محتویات کیت برای 100 تست
| اجزاء | مقدار برای یک کیت صد تستی |
| dLyB | 70 ml |
| WB1 | 27.6 ml |
| WB2 | 10 ml |
| EB | 10 ml |
| Carrier RNA | 620 ug |
| Silica Column | 100 Pieces |
| Microtube | 100 Pieces |
شرایط نگهداری و انتقال محصول
حمل و نقل کیت در دمای محیط انجام می شود. Carrier RNA لیوفلایز را می توان در دمای اتاق نگهداری کرد اما پس از انحلال و آماده سازی باید در دمای منفی بیست درجه سانتیگراد نگهداری شود.
اقدامات احتیاطی و هشدارها
به دلیل استفاده از مواد شیمیایی و اشتعال پذیر، و همچنین حساسیت بالای RNA استخراج شده نسبت به نوکلئازها لازم است حین کار روپوش، دستکش و عینک مناسب استفاده شود و از تماس مواد با بدن جلوگیری به عمل آید.
مواد مورد نیازی که در کیت گنجانده نشده اند
• اتانول ۹۶-۹۹٪ • آنزیم پروتئیناز K (برای استخراج RNA از non-enveloped viruses) • 1.5 ml RNase Free Collection Tube • 2 ml microtube
مشخصات نمونه
نمونه های قابل استفاده در این کیت عبارتند از هر گونه مایعات فاقد سلول بدن اعم از سرم یا پلاسمای خون (در حضور مواد ضد انعقاد به غیر از هپارین)، محیط¬های حمل ویروس (VTM) و سرم کلینیکی حجم پیشنهادی برای هر نمونه 140 ul به ازای 600ul بافر dLyB است. چنانچه حجم نمونه کمتر از این مقدار است با افزودن آب یا سرم کلینیکی آنرا به حجم مورد نظر برسانید.
تهیه بافرهای شستشو
قبل از اولین استفاده مقدار مناسب اتانول 96-100% را مطابق جدول زیر به بافرهای WB1 و WB2 اضافه کرده و خوب هم بزنید تا همگن شود. سپس روی لیبل بطری هر بافر گزینه مربوط به افزوده شدن اتانول را حتما تیک بزنید. بافرهای آماده شده در دمای اتاق نگهداری می شوند.
| بافر | تعداد واکنش | حجم اولیه در بطری | مقدار اتانول مورد نیاز | حجم نهایی |
| WB1 | 100 rxn | 30 ml | 40 ml | 70 ml |
| WB2 | 100 rxn | 10 ml | 50 ml | 60 ml |
افزودن Carrier RNA
برای آماده¬سازی Carrier RNA ابتدا 620 ul از بافر EB به میکروتیوب حاوی Carrier RNA لیوفلایز شده اضافه کرده تا محلول با غلظت 1 ug/ul آماده شود. سپس محلول حاصل را در حجم¬های مناسب تقسیم کرده تا از فریز و دفریز شدن مکرر آن جلوگیری شود (مثلا حجم 12-18 ul بطوری که هر الیکوت بیش از سه بار نیاز به فریز و دفریز نداشته باشد). سپس آنها را در دمای -20°C نگهداری کنید. برای هر استخراج ابتدا یک الیکوت از Carrier RNA را از فریزر خارج کرده، حجم 6 ul از آن را به 600 ul بافر dLyB افزوده و سپس 140 ul نمونه ویروسی را به بافر dLyB اضافه کنید. نکته: این مقدار از Carrier RNA در واکنش¬های پایین دستی تداخلی ایجاد نمی¬کند
مراحل کار
1- در صورت مشاهده کریستال در بافر dLyB آنرا به مدت 5-10 دقیقه در دمای 60 درجه سانتیگراد قرار دهید. 2- مقدار 600 ul بافر dLyB را به همراه 6 ul از Carrier RNA (با غلظت 1ug/ul) به یک میکروتیوب 2 ml اضافه کنید. سپس 140 ul از نمونه ویروسی به آن اضافه کنید. به مدت 10 ثانیه خوب vortex کنید تا مخلوط شود. (نکته: اگر قصد جداسازی RNA از non-enveloped viruses را دارید حتما حجم 10 ul از محلول حاوی آنزیم پروتئیناز K با غلظت اولیه 20 mg/ml به مخلوط فوق اضافه کنید.) 3- مخلوط به مدت 10 دقیقه در دمای اتاق انکوبه شود. 4- حجم 600 ul از اتانول 96-100% به مخلوط فوق اضافه کرده و به مدت 10 ثانیه خوب vortex کنید تا مخلوط شود. نکته: در این مرحله تنها از اتانول استفاده شود. سایر الکل¬ها باعث کاهش بازده و خلوص RNA می شوند. 5- به آرامی حدود 600 ul از محلول فوق را به ستون سیلیکایی منتقل و ستون را بر روی تیوب مربوطه بگذارید. به مدت 1 دقیقه در دور 6000 RCF (~ 7000 RPM) سانتریفیوژ کرده، مایع زیرین را دور ریخته و ستون را مجددا روی تیوب قبلی قرار دهید. 6- مرحله قبل را با باقیمانده محلول حاوی نمونه تکرار کنید. 7- ابتدا دقت کنید الکل به بافرهای شتسشو اضافه شده باشد. سپس 600 ul از بافر WB1 به ستون سیلیکایی اضافه کنید. درب ستون را بسته و حتما چندین بار به خوبی ستون را تکان دهید تا تمام قسمت های آن خوب شسته شود. ستون را روی تیوب قبلی گذاشته و به مدت 1 دقیقه با دور 6000 RCF (~ 7000 RPM) سانتریفیوژ کنید. مایع زیرین را دور ریخته و ستون را مجددا روی همان تیوب قرار دهید. 8- سپس 500 ul بافر WB2 به ستون سیلیکایی اضافه کنید. درب ستون را بسته و و حتما چندین بار به خوبی ستون را تکان دهید تا تمام قسمت¬های آن خوب شسته شود. اینبار ستون را به مدت 3 دقیقه با دور 20000 RCF (~ 15000 RPM) سانتریفیوژ کنید. ستون را به آرامی جدا کرده و بر روی میکروتیوب 1.5 ml تمیز RNase Free قرار دهید. 9- مقدار 60 ul بافر EB که به دمای اتاق رسیده است را با دقت و بدون تماس با دیواره ستون در مرکز فیلتر ریخته و درب ستون را ببندید و به مدت 2-3 دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید. 10- سپس به مدت 1 دقیقه با دور 12000 RCF (~ 10000 RPM) سانتریفیوژ کنید. نکته: بر حسب مدت زمان مورد نیاز RNA استخراج شده را در دمای -20°C یا -80°C نگهداری کنید.
شرایط منع استفاده
کیت طراحی شده برای استخراج نمونه¬های حاوی سلول مانند بافت، گلبول¬های خونی و باکتری مناسب نمیباشد
عیبیابی
| علایم مشاهده شده | دلیل احتمالی | راه حل |
| RNA با غلظت و کیفیت پایین یا عدم حضور RNA | Carrier RNA به بافر dLyB اضافه نشده است | مطابق بروشور Carrier RNA را تهیه و به بافر dLyB اضافه کنید و آزمایش را تکرار کنید |
| مقدار ویروس در نمونه بسیار کم است | بوسیله micro concentrator حجم نمونه اولیه را به 140 ul تغلیظ کنید. از نمونههای تازه یا نمونهایی که در شرایط درست ذخیره شده استفاده کنید | |
| آلودگی بافرها و ظروف به RNase | از تیپ و تیوبهای RNase Free استفاده کرده و از تماس آنها با دست و لباس خودداری کنید. | |
| اتانول کافی به بافرها اضافه نشده است | طبق بروشور و مراحل کار اتانول به بافرها اضافه کنید | |
| نگهداری در دمای نامناسب | از نمونه تازه برای آنالیز پایین دستی استفاده کنید. اگر لازم است RNase Inhibitor به نمونه و EB اضافه کنید. از فریز-دفریز مکرر نمونه خودداری کنید | |
| شستشو نامناسب ستون در مراحل شستشو | در هر مرحله شستشو پس از افزودن بافرهای شستشو WB1 یا WB2 حتما چندین بار به آرامی با دست ستون را Invert کنید | |
| عدم تشخیص RNA استخراج شده با روش مولکولی | کیفیت و غلظت نامناسب RNA استخراج شده | به راهحلهای اشاره شده فوق مراجعه شود |
| PCR را با حجم بیشتر مثلا دو برابر از نمونه تکرار کنید |
اطلاعات تکمیلی
اطلاعات تکمیلی |
|
|---|---|
| بسته بندی | جهت خرید عمده تماس بگیرید. |
| نکات مهم محصول | جهت خرید عمده تماس بگیرید. |